Підготовка зразків:
Збір зразків: Зберіть зразки, такі як кров, тканина, слина та сеча відповідно до мети експерименту.
Екстракція ДНК: Використовуйте спеціальний набір ДНК для вилучення ДНК із зразка.
Підготовка реакції ПЛР:
ПРИМІТНІ ПРИМІТКИ: ПРОЕКТУВАННЯ ПАРТІЙНИХ ПАРІВ на основі цільової послідовності для ампліфікації ДНК шаблону.
Приготуйте реакційну суміш: включаючи шаблону ДНК, праймери, буфер, ДНК -полімеразу, DNTP (Deoxynucleoside Triphospates), Mg 2+ тощо тощо.
Встановити програму ПЛР:
Налаштування інструменту ПЛР: Введіть попередньо встановлені параметри циклу ПЛР, такі як температура попереднього нагрівання 95 градусів, температура денатурації (наприклад, 95 градусів), температура відпалу (наприклад, 55 градусів), температура розширення (наприклад, 72 градусів) та кількість циклів.
Реакція ПЛР:
Додайте зразок: Додайте реакційну суміш до реакційного резервуара або мікросхеми ПЛР, і кожен зразок зазвичай має одну реакцію.
Виконайте ПЛР: цикли інструменту ПЛР відповідно до попередньо встановленої програми, включаючи кроки опалення, охолодження, відпалу та розширення.
Аналіз продуктів:
Охолодження після ампліфікації: Після завершення ПЛР зразок коротко охолоджується при 4 градусах.
Електрофоретичне розділення: використовуйте технологію гель -електрофорезу, таку як електрофорез агарозного гелю, для розділення продуктів ПЛР різної довжини.
Сканування флуоресценції: флуоресцентно мічені праймери випромінюють світло певної довжини хвилі в ампліфікованому продукті, і інструмент ПЛР читає ці сигнали та записує їх.
Обробка та інтерпретація даних:
Програмне забезпечення для аналізу даних: Використовуйте спеціалізоване програмне забезпечення для аналізу флуоресцентного сигналу та обчислення концентрації або відносної концентрації цільового фрагмента.
Інтерпретація результатів: на основі кривої та базової лінії ПЛР, визначте, чи є ПЛР успішною, чи існує цільовий фрагмент і наскільки це.
Запис та збереження результатів:
Запишіть результати в експериментальному звіті та належним чином зберігайте вихідні дані та зразки.